USO DE LA LECTINA DE OLNEYA TESOTA (PF2) PARA LA PURIFICACIÓN Y DETECCIÓN HISTOQUÍMICA DE UNA PROTEÍNA DE CHOQUE TÉRMICO (GP14) DE BAZO/ USE OF THE Olneya tesota LECTIN (PF2) FOR PURIFICATION AND HISTOCHEMICAL DETECTION OF A SPLEEN HEAT SHOCK PROTEIN

Resumen

PF2 es una lectina de las semillas de Olneya tesota (Palo fierro) con afinidad alta hacia carbohidratos complejos triantenarios tetrasialilados. El objetivo de este estudio fue localizar glicoconjugados que interactúen con PF2 en secciones de tejido de bazo y purificar glicoproteínas usando cromatografía de afinidad con PF2. Se incubaron secciones finas de tejido de bazo con PF2 biotinilada y se observaron interacciones con linfocitos en los nódulos y estructuras internas de tipo reticular en la pulpa blanca. Se prepararon extractos de bazo para purificar la glicoproteína detectada, usando dos etapas cromatográficas, intercambio iónico (CM-celulosa) y afinidad (PF2-agarosa). Por electroforesis nativa y con SDS se mostró una glicoproteína monomérica de 14 kDa (GP14). Una vez digerida con una proteasa, se identificaron seis secuencias peptídicas en la GP14. Cada péptido mostró 100% de homología a secuencias internas de diferentes proteínas de choque térmico de la familia de 70 kDa (HSP70). Esta similitud con las HSP fue confirmada por electrotransferencia e inmunodetección usando anticuerpos específicos para HSP70. En conclusión, la lectina PF2 tiene especificidad hacia un glicoconjugado denominado GP14 que pudiera ser una glicoproteína de estrés del bazo humano, identificada por primera vez. ABSTRACT PF2 is a lectin from Olneya tesota (Palo fierro) seeds with high affinity towards triantennary tetrasialylated complex carbohydrates. The goal of this study was to localize PF2-interacting glycoconjugates in spleen tissue thin sections, and to purify glycoproteins using PF2 affinity chromatography. Biotinylated PF2 was incubated with thin sections of fixed spleen tissues and interactions with lymphocytes in nodules of splenic white pulp were observed. Two chromatographic steps, using ion exchange chromatography (CM-cellulose) and affinity chromatography (PF2-agarose) made possible the purification of a glycoprotein from spleen extracts. Both SDS-PAGE and PAGE showed a 14-kDa monomeric glycoprotein (GP14). GP14 was protease digested and the sequences of six peptides were identified. Each of the GP14 peptides showed 100% homology to different internal sequences of the 70-kDa family of heat shock proteins (HSP70). The similarity with HSP was confirmed by Western blot using an antibody specific to HSP70. In conclusion, PF2 lectin has specificity toward a glycoconjugate named GP14 from spleen extract. GP14 could be a novel stress glycoprotein from human spleen.